【摘要】 目的 觀察柴紅丸對實(shí)驗(yàn)性黃褐斑模型小鼠的肝臟和皮膚中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影響。方法 除空白對照組動(dòng)物外，其余動(dòng)物采用肌肉注射黃體酮并紫外線照射法致黃褐斑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。動(dòng)物分組，分別按劑量灌胃給藥30天后，處死動(dòng)物并分別取肝臟和背部皮膚各一塊，生理鹽水制成10%的組織勻漿液，離心，取上清液，檢測各組小鼠肝臟和皮膚中SOD活性和MDA含量。結(jié)果 柴紅丸高、中劑量能明顯升高黃褐斑模型動(dòng)物的肝臟和皮膚中SOD活性(P<0.01)、降低MDA含量(P<0.01);柴紅丸低劑量亦能明顯升高黃褐斑模型動(dòng)物皮膚中SOD活性(P<0.01)、降低肝臟和皮膚中MDA含量(P<0.01)。結(jié)論 柴紅丸對實(shí)驗(yàn)性黃褐斑模型小鼠有較好的治療作用，其機(jī)制可能與升高抗氧化酶活性、降低過氧化物含量有關(guān)。

　　【關(guān)鍵詞】柴紅丸;黃褐斑;小鼠

　　柴紅丸是我院于80年代在逍遙丸的基礎(chǔ)上，結(jié)合了本地具體情況和多年臨床實(shí)踐加減而成的用于治療黃褐斑的經(jīng)驗(yàn)方，具有疏肝活血、化瘀消斑的功能，經(jīng)過多年臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，療效確切。為探討其治療黃褐斑的現(xiàn)代藥理機(jī)制，我們采用局部紫外線照射并肌肉注射黃體酮的方法，觀察柴紅丸對小鼠肝臟和皮膚SOD活性、MDA含量的影響，為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

　　1. 材料與方法

　　1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級NIH小鼠，60只，雌性，廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證號(hào)和動(dòng)物合格證號(hào)分別為SCXK(粵)2003-0002和粵監(jiān)證字2007A021。實(shí)驗(yàn)于廣東省中醫(yī)研究所SPF級動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室完成，其實(shí)驗(yàn)室設(shè)施使用許可證號(hào)：SYXK(粵)2005-059。

　　1.2實(shí)驗(yàn)藥材及試劑 柴紅丸，中藥配方丸劑，由汕頭市皮膚醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)：20081216。百消丹(何首烏、枸杞子、當(dāng)歸、桑葚、蘆薈素等組成，具有祛斑防皺、美容養(yǎng)顏、調(diào)和氣血的功能)，鄭州中奧生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20081008。黃體酮注射液，上海通用藥業(yè)股份有限公司，051003;丙二醛(MDA)測試盒，南京建成生物工程研究所，20080708;超氧化物歧化酶(SOD)測試盒, 南京建成生物工程研究所，20080708。

　　1.3 儀器 紫外線照射燈(UVB);JJ-1型組織研磨器，深圳天南海北實(shí)業(yè)有限公司;721分光光度計(jì)，上海精密儀器廠。

　　1.4 方法

　　1.4.1 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

　　所有計(jì)量資料以均值加減標(biāo)準(zhǔn)差( )表示，多組間均數(shù)的比較先采用單因素方差分析(One-Way ANOVA);方差齊時(shí)，組間均數(shù)兩兩比較用SNK法;方差不齊時(shí)，組間均數(shù)兩兩比較用Dunnett’s T3法。由SPSSl5.0軟件完成，α=0.05。

　　1.4.2 動(dòng)物試驗(yàn)

　　1.4.2.1 劑量設(shè)置 以藥品說明書標(biāo)示臨床日用量作為基礎(chǔ)，參考《中藥藥理研究方法學(xué)》中劑量換算方法“體表面積比”換算動(dòng)物試驗(yàn)劑量作為臨床等效劑量。百消丹小鼠劑量為1.82 g/kg。柴紅丸高劑量小鼠給藥量為6.24 g/kg，中劑量為3.12 g/kg，低劑量為1.56 g/kg(相當(dāng)于分別為4倍臨床等效劑量、2倍臨床等效劑量、臨床等效劑量)。

　　1.4.2.2 測定方法

　　取60只SPF級NIH雌性小鼠，體重18～22g，適應(yīng)環(huán)境后，按體重隨即均分為空白對照組，模型對照組，百消丹組，柴紅丸高、中、低劑量組，每組10只。分組后，分別灌胃給藥，同時(shí)按照以下步驟處理[1，2，3]：

　　(1)、除空白對照組外其余各組小鼠均后腿肌肉(兩腿交替)注射黃體酮注射液，20 mg/kg，5 ml/kg體重，即相當(dāng)于人臨床等效劑量的8倍的劑量;空白對照組小鼠肌肉注射同劑量的滅菌注射用水;每周注射6次，連續(xù)30 d。

　　(2)、用8% Na2S水溶液小鼠背部皮膚褪毛后，以波長為320 nm的中波紫外線(UVB)照射小鼠，每日1次，每次照射約20 min，連續(xù)照射30 d。

　　(3)、各給藥組動(dòng)物分別按劑量灌胃給藥，20 ml/kg，每天1次，連續(xù)30 d。

　　在試驗(yàn)的第30d，末次給藥1 h后，頸椎脫臼處死小鼠，取肝臟及背部已褪毛皮膚各一塊。用預(yù)冷生理鹽水(4℃)沖洗，除凈血液等雜質(zhì)，濾紙拭干，切取皮膚、肝臟各約0.5 g，手術(shù)剪剪碎，用組織研磨器勻漿，以1:9(W/V)加入冰生理鹽水，制成10%組織勻漿。勻漿液以3500 r/min離心15 min，取上清液在721分光光度計(jì)上測定SOD、MDA的OD值，計(jì)算其含量。比較各組差異。

　　2. 結(jié)果

　　2.1 柴紅丸對小鼠SOD活性的影響 結(jié)果見1。

　　肝臟SOD活性：與空白對照組相比，模型對照組SOD活性明顯降低(P<0.05);與模型對照組相比，百消丹組、柴紅丸高、中劑量組SOD活性顯著升高(P<0.01)，柴紅丸低劑量組SOD含量也有所升高但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);與百消丹組相比，柴紅丸低劑量組SOD活性顯著降低(P<0.05)。

　　皮膚SOD活性：與空白對照組相比，模型對照組SOD含量明顯降低(P<0.05)，其余各組SOD含量均無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);與模型對照組相比，百消丹組、柴紅丸高、中、低劑量組SOD含量顯著升高(P<0.01)。與百消丹組相比，模型對照組SOD含量顯著降低(P<0.01)，其余各組均無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

　　柴紅丸高、中、低劑量組兩兩比較，柴紅丸高、中、低劑量組小鼠肝臟、皮膚的SOD數(shù)值雖有不同但均無顯著性差異，也無明顯量效關(guān)系。

　　注：與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對照組比較#P<0.05，

　　##P<0.01;與百消丹組相比☆P<0.05，☆☆P<0.01。

　　2.2 柴紅丸對小鼠MDA含量的影響 結(jié)果表2。

　　肝臟中MDA含量：與空白對照組相比，模型對照組MDA含量升高并具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01);與模型對照組相比，百消丹組、柴紅丸高、中、低劑量組MDA含量顯著降低且具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01);與百消丹組相比，模型對照組MDA含量顯著升高，柴紅丸各給藥組無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

　　皮膚中MDA含量：與空白對照組相比，模型對照組MDA含量升高且具有顯著性差異(P<0.01);與模型對照組相比，百消丹組、柴紅丸高、中、低劑量組MDA含量都降低且具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01);與百消丹組相比，柴紅丸高、中、低劑量組均顯著降低皮膚中MDA含量(P<0.01)。

　　柴紅丸高、中、低劑量組兩兩比較，柴紅丸高、中、低劑量組小鼠肝臟、皮膚的MDA數(shù)值雖有不同但均無明顯差異，也無明顯量效關(guān)系。

　　3. 討論

　　黃褐斑是臨床常見的難治性皮膚病之一，其發(fā)病原因和機(jī)制較為復(fù)雜，一般認(rèn)為與內(nèi)分泌因素[4]、紫外線照射、精神神經(jīng)因素[5]、妊娠或口服避孕藥[6]及不良生活習(xí)慣等有關(guān),最終病理上導(dǎo)致黑色素在皮下沉積而形成。實(shí)驗(yàn)研究表明[7-10]氧自由基與皮膚黑色素的形成及色素沉著有關(guān);正常情況下氧化與抗氧化酶系統(tǒng)保持著動(dòng)態(tài)平衡，抗氧化劑SOD能有效清除多余超氧自由基如MDA等，使其形成減少，從而推斷其阻止了黃褐斑的產(chǎn)生。因此，本文采用黃體酮注射液(孕激素)攻擊合并紫外光照射雌性小鼠的方法，復(fù)制黃褐斑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝臟和皮膚SOD、MDA含量均顯著升高，且與空白對照組相比具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(有P<0.01或P<0.05)，說明動(dòng)物造模是成功的，這與文獻(xiàn)報(bào)道[11，12]相一致。給藥后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟和皮膚中SOD活性均明顯增高、MDA含量明顯降低，說明柴紅丸能提高黃褐斑模型小鼠機(jī)體SOD活性，清除多余氧自由基，從而可能對黃褐斑起到治療作用，同時(shí)我們用現(xiàn)在臨床用于治療黃褐斑較為有效的百消丹做比較，其差異有顯著性意義。

　　黃褐斑祖國醫(yī)學(xué)屬于“黧黑斑”“面塵”等范疇，是臨床的常見病、多發(fā)病，《外科正宗·卷四》記載“黧黑斑者，水虧不能制火，血弱不能華肉，以致火燥結(jié)成斑黑，色枯不澤?！?《醫(yī)宗金鑒?外科心法要訣·卷六十三》記載“憂思抑郁，血弱不華，火燥結(jié)滯而生于面上，婦女多有之”;其主要的病因?yàn)榍橹静凰?，肝郁氣滯，氣滯則血瘀，氣滯血瘀則生為斑。故黃褐斑的治療宜疏肝解郁、活血祛瘀為主。柴紅丸是在逍遙散的基礎(chǔ)上加減而成，是我院多年來應(yīng)用于臨床的治療黃褐斑的有效協(xié)定處方，方中以紅丹參活血化瘀消斑為君藥，柴胡、薄荷疏肝理氣為臣，配合當(dāng)歸尾、紅花、赤芍以加強(qiáng)活血化瘀，梔子疏肝理氣共為佐藥，蜂蜜補(bǔ)中緩急為使，諸藥合用，共同起到疏肝解郁、活血化瘀消斑的功效，使肝腎充足，氣通血活，則黑斑消除。通過我們的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)柴紅丸能提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)體SOD活性，清除多余氧自由基，這方面可能是其治療黃褐斑的主要現(xiàn)代藥理作用。

　　(作者單位：1.汕頭市皮膚性病防治院; 2.廣東省中醫(yī)研究所)