細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK細(xì)胞)因具有體外增殖倍數(shù)高、抗瘤譜廣、殺瘤活性強(qiáng)、副作用極小等特點(diǎn)而受到關(guān)注。研究表明，CIK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用是LAK細(xì)胞的10倍。

　　據(jù)武漢腫瘤醫(yī)院專(zhuān)家介紹，CIK細(xì)胞免疫治療是腫瘤治療中的一項(xiàng)新技術(shù)，目前已逐步在臨床上應(yīng)用，因此，制訂科學(xué)、嚴(yán)格的技術(shù)規(guī)范對(duì)該技術(shù)的正確使用及推廣意義重大。

　　但迄今國(guó)內(nèi)還沒(méi)有關(guān)于CIK細(xì)胞培養(yǎng)和臨床應(yīng)用的統(tǒng)一技術(shù)規(guī)范。武漢腫瘤醫(yī)院生物治療中心參考國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局199年制訂的《新生物制品審批辦法》和美國(guó)FDA1998年制訂的《人體細(xì)胞治療和基因治療指導(dǎo)原則》，結(jié)合數(shù)年的CIK細(xì)胞臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，制訂出我們的CIK細(xì)胞臨床應(yīng)用技術(shù)規(guī)范，現(xiàn)介紹如下，供同行切磋和討論，以期促成國(guó)內(nèi)性統(tǒng)一技術(shù)規(guī)范的早日制定。

　　一、CIK細(xì)胞培養(yǎng)條件

　　1、細(xì)胞培養(yǎng)場(chǎng)地

　　符合國(guó)家GMP標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室，采用彩綱板框架，自流平地面，保持符合實(shí)驗(yàn)室要求的恒定溫度和濕度。細(xì)胞培養(yǎng)場(chǎng)地應(yīng)定期清潔和消毒。

　　2、主要材料與試劑

　　細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)該用無(wú)血清培養(yǎng)基，其他細(xì)胞活化因子采用國(guó)內(nèi)外正式廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，藥品應(yīng)有國(guó)藥準(zhǔn)字文號(hào)。每批新的試劑都應(yīng)該進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)及活性測(cè)定。一次性使用的物品不得重復(fù)使用。

　　3、消毒

　　實(shí)驗(yàn)器械、用品，凡能干烤的，應(yīng)在180℃烤Zh(或20℃lh)，其他物品用高壓蒸汽消毒。

　　二、CIK細(xì)胞制備

　　1、細(xì)胞供體(培養(yǎng)用單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源)自體細(xì)胞:采集患者自體外周血中的單個(gè)核細(xì)胞。自體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是可以避免交叉感染。同種異體細(xì)胞:細(xì)胞來(lái)源必須是當(dāng)?shù)刂行难静杉姆汐I(xiàn)血條件的健康獻(xiàn)血員細(xì)胞。一些中、晚期腫瘤患者或接受放、化療后的患者，由于機(jī)體免疫功能低下，外周血中的單個(gè)核細(xì)胞無(wú)法進(jìn)行擴(kuò)增，因此可用同種異體細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。有些學(xué)者認(rèn)為，腫瘤患者存在免疫耐受，自體來(lái)源的CIK細(xì)胞無(wú)法打破免疫耐受，發(fā)揮有效殺瘤功能，建議應(yīng)用異體來(lái)源的 CIK細(xì)胞進(jìn)行治療。

　　2、CIK細(xì)胞培養(yǎng)

　?、貱IK細(xì)胞培養(yǎng)方法：目前主要參照美國(guó)斯坦福大學(xué)骨髓移植中心建立的cIK細(xì)胞培養(yǎng)方法:第0天加入IFN一丫50()U/Inl，置37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)24h，第1天加入幾一230UZ創(chuàng)，cD3longlml，幾一lloUlml繼續(xù)培養(yǎng)，每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)并根據(jù)情況進(jìn)行擴(kuò)增。

　　②CIK細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間：培養(yǎng)10d后細(xì)胞就表現(xiàn)出殺瘤活性，巧一20d達(dá)到高峰，因此臨床用CIK細(xì)胞應(yīng)在培養(yǎng)后的10一20d內(nèi)收獲。

　?、跜IK細(xì)胞的形態(tài)及表面標(biāo)記：在顯微鏡下細(xì)胞呈圓形，體積增大，胞質(zhì)飽滿(mǎn)，折光性好，有顆粒，核增大，細(xì)胞表面有很多突起和偽足。流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn) CD3+CD56一及CD3+CD56+細(xì)胞增多。有報(bào)道，CIK細(xì)胞的殺傷活性主要來(lái)自CD3+cD56十雙陽(yáng)性細(xì)胞。

　?、軨IK細(xì)胞殺傷活性檢測(cè)：采用唾哇藍(lán)(MTT)法或乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測(cè)定殺傷活性，當(dāng)蜘靶比為20:1時(shí)，應(yīng)保證C仄細(xì)胞對(duì)自然殺傷細(xì)胞(NK)敏感腫瘤株K562細(xì)胞的殺傷率大于50%，對(duì)NK不敏感腫瘤株網(wǎng)1細(xì)胞的殺傷率大于30%。

　?、轈IK細(xì)胞質(zhì)檢：CIK細(xì)胞質(zhì)檢包括無(wú)菌檢測(cè)(需氧菌檢測(cè)，厭氧菌檢測(cè)，真菌檢測(cè)，支原體檢測(cè))、細(xì)胞活率檢測(cè)和熱源檢測(cè)。

　?、逤IK細(xì)胞收獲：培養(yǎng)終止后離心棄上清液，用生理鹽水洗滌細(xì)胞2次以上，重新混勻，懸于10一Zonil輸注用生理鹽水中。