細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK細胞)因具有體外增殖倍數高、抗瘤譜廣、殺瘤活性強、副作用極小等特點而受到關注。研究表明，CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷作用是LAK細胞的10倍。

　　據武漢腫瘤醫(yī)院專家介紹，CIK細胞免疫治療是腫瘤治療中的一項新技術，目前已逐步在臨床上應用，因此，制訂科學、嚴格的技術規(guī)范對該技術的正確使用及推廣意義重大。

　　但迄今國內還沒有關于CIK細胞培養(yǎng)和臨床應用的統一技術規(guī)范。武漢腫瘤醫(yī)院生物治療中心參考國家食品藥品監(jiān)督管理局199年制訂的《新生物制品審批辦法》和美國FDA1998年制訂的《人體細胞治療和基因治療指導原則》，結合數年的CIK細胞臨床應用經驗，制訂出我們的CIK細胞臨床應用技術規(guī)范，現介紹如下，供同行切磋和討論，以期促成國內性統一技術規(guī)范的早日制定。

　　一、CIK細胞培養(yǎng)條件

　　1、細胞培養(yǎng)場地

　　符合國家GMP標準實驗室，采用彩綱板框架，自流平地面，保持符合實驗室要求的恒定溫度和濕度。細胞培養(yǎng)場地應定期清潔和消毒。

　　2、主要材料與試劑

　　細胞培養(yǎng)應該用無血清培養(yǎng)基，其他細胞活化因子采用國內外正式廠家生產的產品，藥品應有國藥準字文號。每批新的試劑都應該進行無菌試驗及活性測定。一次性使用的物品不得重復使用。

　　3、消毒

　　實驗器械、用品，凡能干烤的，應在180℃烤Zh(或20℃lh)，其他物品用高壓蒸汽消毒。

　　二、CIK細胞制備

　　1、細胞供體(培養(yǎng)用單個核細胞來源)自體細胞:采集患者自體外周血中的單個核細胞。自體細胞的優(yōu)點是可以避免交叉感染。同種異體細胞:細胞來源**是當地中心血站采集的符合獻血條件的健康獻血員細胞。一些中、晚期腫瘤患者或接受放、化療后的患者，由于機體免疫功能低下，外周血中的單個核細胞無法進行擴增，因此可用同種異體細胞進行培養(yǎng)。有些學者認為，腫瘤患者存在免疫耐受，自體來源的CIK細胞無法打破免疫耐受，發(fā)揮有效殺瘤功能，建議應用異體來源的 CIK細胞進行治療。

　　2、CIK細胞培養(yǎng)

　　①CIK細胞培養(yǎng)方法：目前主要參照美國斯坦福大學骨髓移植中心建立的cIK細胞培養(yǎng)方法:第0天加入IFN一丫50()U/Inl，置37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)24h，第1天加入幾一230UZ創(chuàng)，cD3longlml，幾一lloUlml繼續(xù)培養(yǎng)，每天觀察細胞生長并根據情況進行擴增。

　　②CIK細胞培養(yǎng)時間：培養(yǎng)10d后細胞就表現出殺瘤活性，巧一20d達到高峰，因此臨床用CIK細胞應在培養(yǎng)后的10一20d內收獲。

　?、跜IK細胞的形態(tài)及表面標記：在顯微鏡下細胞呈圓形，體積增大，胞質飽滿，折光性好，有顆粒，核增大，細胞表面有很多突起和偽足。流式細胞儀檢測發(fā)現 CD3+CD56一及CD3+CD56+細胞增多。有報道，CIK細胞的殺傷活性主要來自CD3+cD56十雙陽性細胞。

　?、軨IK細胞殺傷活性檢測：采用唾哇藍(MTT)法或乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測定殺傷活性，當蜘靶比為20:1時，應保證C仄細胞對自然殺傷細胞(NK)敏感腫瘤株K562細胞的殺傷率大于50%，對NK不敏感腫瘤株網1細胞的殺傷率大于30%。

　?、轈IK細胞質檢：CIK細胞質檢包括無菌檢測(需氧菌檢測，厭氧菌檢測，真菌檢測，支原體檢測)、細胞活率檢測和熱源檢測。

　　⑦CIK細胞收獲：培養(yǎng)終止后離心棄上清液，用生理鹽水洗滌細胞2次以上，重新混勻，懸于10一Zonil輸注用生理鹽水中。